控制菌检查法

供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培养基的实际用量同控制菌检查方法的验证。

阳性对照试验 供试品进行控制菌检查时，应做阳性对照试验。阳性对照试验的加菌量为10~100cfu，方法同供试品的控制菌检查。阳性对照试验应检出相应的控制菌。

阴性对照试验 取稀释液 10m1 照相应控制菌检查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。

阴性对照试验 取稀释液10m1照相应控制菌检查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。

控制菌检查采用培养基稀释法时，可加大增菌培养基的用量。

基本程序∶

供试液制备 → 增菌培养 → 选择性培养基培养 → 挑取疑似菌落 → 生化试验 → 报告结果

1.大肠菌群的检查

取含适量（不少于 10m1）的胆盐乳糖发酵培养基管3支，分别加入1∶10 的供试液lml（含供试品0.1g 或0.1m1）、1∶100的供试液lml（含供试品0.01g或0.OIml）、1∶1000的供试液lml（含供试品0.001g 或0.001ml），另取1支胆盐乳糖发酵培养基管加入稀释液lml作为阴性对照管。培养 18～24小时。

胆盐乳糖发酵管若无菌生长、或有菌生长但不产酸产气，判该管未检出大肠菌群;若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。

若平板上无菌落生长，或生长的菌落与表2所列的菌落形态特征不符或为非革兰阴性无芽孢杆菌，判该管未检出大肠菌群;若平板上生长的菌落与表 2 所列的菌落形态特征相符或疑似，且为革兰阴性无芽孢杆菌，应进行确证试验。

                             表2 大肠菌群菌落形态特征

确证试验 从上述分离平板上挑选4～5个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养 24～48小时。若产酸产气，判该胆盐乳糖发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。根据大肠菌群的检出管数，按表3报告 1g 或lml供试品中的大肠菌群数。

                           表3 可能的大肠菌群数表

                       注∶+代表检出大肠菌群;一代表未检出大肠菌群。

2.梭菌检查

取供试液 10ml（相当于供试品1g、lml）2份，其中1份置80℃保温 10分钟后迅速冷却。上述 2份供试液直接或处理后分别接种至 100ml的新鲜庖肉培养基中。各培养基管在厌氧条件下培养72～96小时。如试验管不出现浑浊、产气、消化碎肉、臭气等现象，判供试品未检出梭菌;否则，应取上述培养物0.2m1，涂抹接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上，在厌氧条件下培养 48～72小时；若平板上无菌落生长，判供试品未检出梭菌;若平板上有菌落生长，应挑选2~3个菌落分别进行革兰染色和过氧化氢酶试验。

过氧化氢酶试验 取上述平板上的菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。

若上述可疑菌落为革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢，过氧化氢酶阴性，判供试品检出梭菌，否则判供试品未检出梭菌。

结果判断

供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。

供试品的**数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，**复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。

眼用制剂检出霉菌和酵母菌数时，须以两次复试结果均不得长菌，方可判供试品的霉菌和酵母菌数符合该品种项下的规定。

若供试品的**数、霉菌和酵母菌数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定;若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。