载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

载体保藏法操作步骤

1．滤纸保藏法

（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm 的小条，装入0．6×8cm 的安瓿管中，每管1—2 张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃** 30 分钟。

（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。

（3）取**脱脂牛乳1—2ml 滴加在**培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。

（4）用**镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。

（6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。

（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。

**、酵母菌、丝状**均可用此法保藏，前两者可保藏2 年左右，有些丝状**甚至可保藏14—17 年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。

2．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀**，加热煮沸30 分钟，以去除其中的有机质。

（2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。

（3）烘干，用40 目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。

（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通过100 目筛子过筛，以去除粗颗粒。

（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g 左右， 塞上棉塞，进行**，烘干。

（7）抽样进行无菌检查，每10 支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养 48 小时，若仍有杂菌，则需全部重新**，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。

（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好） 优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。

（9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液， 以接种针拌匀。

（10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。

（11）每10 支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。

（12）若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。

（13）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。

此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在***工业生产中应用*广，效果亦好，可保存2 年左右，但应用于营养细胞效果不佳。